混合型饲料添加剂 甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定

 

 

 

1、范围

 

    本文件规定了混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的高效液相色谱测定方法。

    本文件适用于混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢查耳酮的测定。

 

    本方法糖精钠检出限为200 mgkg、纽甜检出限为50 mgg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮检出限为20mg/kg,糖精钠定量限为400 mgkg、纽甜定量限为100 mgkg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮定量限为40 mg/kg

 

2 规范性引用文件

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件该日期对应的版本适用于本文件:是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

    GB/T20195动物饲料试样的制备

 

3术语和定义

    本文件没有需要界定的术语和定义。

 

4 原理

    混合型饲料添加剂甜味剂充分溶解在30%的乙腈水溶液后用配有紫外(UV)检测器或二极管阵列(DAD)检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量计算出糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。

 

 

5 试剂与材料

    除非有特殊说明，本测定方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的1·级水。

 

5.1 乙腈(色谱级)

5.2 磷酸氢二铵。

5.3 磷酸。

5.4 糖精钠标准品(CAS:6155-57-3):纯度>99%

5.5 纽甜标准品(CAS:165450-17-9):纯度>98%。

5.6 新甲基橙皮苷氢查耳酮标准品(CAS:20702-77-6):纯度>99.5%。5.7 0.02 mol 磷酸氢二铵缓冲溶液:称取 2.64g磷酸氢二铵，加入 700mL, 水，用磷酸调 pH 至 2.5,定容到1000mL容量瓶中，用0.45um 滤膜抽滤。

 

5.8 糖精钠、纽甜、新甲基橙皮昔二氢查耳酮标准溶液:称取0.1g(精确至0.00001g)预先在 120℃烘箱烘干 4h 的糖精钠标准品(5.4)、0.1g(精确至 0.00001g)纽甜标准品(5.5)、0.1g(精确至 0.00001g)新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品(5.6)于100mL,容量瓶中，加入 30%乙腈水溶液定容，摇匀静置。此溶液糖精钠浓度为1mg/m，组甜浓度约为1mg/m、新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度为1mg/mL。

 

5.9 糖精钠、组甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液:分别吸取 0.1mL，0.5mL,1mL，5mL,10mL糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢査耳酮标准溶液至10 mL,容量瓶中，用 30%乙腈水溶液定容,临用现配。

5.10 水性微孔滤膜:孔径0.45 m。

 

6 仪器与设备

6.1  分析天平:感量 0.00001g，感量0.0001g.

6.2 超声波震荡器。

6.3 高效液相色谱仪:配有紫外(UV)检测器或二极管阵列(DAD)测器。

 

7 试样制备与保存

    按GB/T20195制备样品，至少200g;粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装入口瓶中，避光保存，备用。

 

8 测定步骤

8.1 样品溶液制备

    称取试样 0.5g(精确至 0.0001g)于50m,烧杯中,加入适量30%乙腈水溶液超声波震荡提取10min;将提取液移入 100m 容量瓶中使用 30%乙腈水溶液定容，摇匀静置。提取液经 0.45um 滤膜过滤后用于色谱分析。

8.2 高效液相色谱参考条件

a) 色谱柱:Cs柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5pm:

b) 流动相:乙腈+0.02moL磷酸氢二铵缓冲溶液-35+65;

c) 流速:1mL/min;d)检测波长:糖精钠、新甲基橙皮苷二氢査耳酮检测波长283nm;纽甜检测波长210nm。e)杜温:30℃℃:

f) 进样体积:10L。

8.3 标准系列工作溶液和试样溶液测定

    分别吸取糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液和试样溶液，按8.2的色谱条件进行色谱分析测定。测定时，样品溶液与标准工作溶液等体积进样测定，并保证样品溶液中的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内,试样溶液中待测物超出线性范围时适当稀释后再用于色谱分析。糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢查耳酮标准溶液的高效液相色谱图参见附录A。

 

9 结果计算与表述

    试样中糖精钠、纽甜和新甲基橙皮苷二氢査耳酮的含量w，以质量分数“%”表示，按下式计算:

 

    式中:

    c-由标准曲线得出的试样中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮首二氢査耳酮的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mmL):

    V一试样溶液总体积，单位为毫升(mL);

    n-稀释倍数;

    m-试样的质量，单位为克(g);

    测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留至小数点后2位。

 

10 精密度

    在重复性条件下，两次独测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的5%。

 

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