混合型饲料添加剂 甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定
1、范围
本文件规定了混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于混合型饲料添加剂甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢查耳酮的测定。
本方法糖精钠检出限为200 mgkg、纽甜检出限为50 mgg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮检出限为20mg/kg,糖精钠定量限为400 mgkg、纽甜定量限为100 mgkg、新甲基橙皮苷二氢查耳酮定量限为40 mg/kg
2 规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
混合型饲料添加剂甜味剂充分溶解在30%的乙腈水溶液后用配有紫外(UV)检测器或二极管阵列(DAD)检测器的高效液相色谱仪测定,外标法定量计算出糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
5 试剂与材料
除非有特殊说明,本测定方法中所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的1·级水。
5.1 乙腈(色谱级)
5.2 磷酸氢二铵。
5.3 磷酸。
5.4 糖精钠标准品(CAS:6155-57-3):纯度>99%
5.5 纽甜标准品(CAS:165450-17-9):纯度>98%。
5.6 新甲基橙皮苷氢查耳酮标准品(CAS:20702-77-6):纯度>99.5%。5.7 0.02 mol 磷酸氢二铵缓冲溶液:称取 2.64g磷酸氢二铵,加入 700mL, 水,用磷酸调 pH 至 2.5,定容到1000mL容量瓶中,用0.45um 滤膜抽滤。
5.8 糖精钠、纽甜、新甲基橙皮昔二氢查耳酮标准溶液:称取0.1g(精确至0.00001g)预先在 120℃烘箱烘干 4h 的糖精钠标准品(5.4)、0.1g(精确至 0.00001g)纽甜标准品(5.5)、0.1g(精确至 0.00001g)新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品(5.6)于100mL,容量瓶中,加入 30%乙腈水溶液定容,摇匀静置。此溶液糖精钠浓度为1mg/m,组甜浓度约为1mg/m、新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度为1mg/mL。
5.9 糖精钠、组甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液:分别吸取 0.1mL,0.5mL,1mL,5mL,10mL糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢査耳酮标准溶液至10 mL,容量瓶中,用 30%乙腈水溶液定容,临用现配。
5.10 水性微孔滤膜:孔径0.45 m。
6 仪器与设备
6.1 分析天平:感量 0.00001g,感量0.0001g.
6.2 超声波震荡器。
6.3 高效液相色谱仪:配有紫外(UV)检测器或二极管阵列(DAD)测器。
7 试样制备与保存
按GB/T20195制备样品,至少200g;粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛,充分混匀,装入口瓶中,避光保存,备用。
8 测定步骤
8.1 样品溶液制备
称取试样 0.5g(精确至 0.0001g)于50m,烧杯中,加入适量30%乙腈水溶液超声波震荡提取10min;将提取液移入 100m 容量瓶中使用 30%乙腈水溶液定容,摇匀静置。提取液经 0.45um 滤膜过滤后用于色谱分析。
8.2 高效液相色谱参考条件
a) 色谱柱:Cs柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒度5pm:
b) 流动相:乙腈+0.02moL磷酸氢二铵缓冲溶液-35+65;
c) 流速:1mL/min;d)检测波长:糖精钠、新甲基橙皮苷二氢査耳酮检测波长283nm;纽甜检测波长210nm。e)杜温:30℃℃:
f) 进样体积:10L。
8.3 标准系列工作溶液和试样溶液测定
分别吸取糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准工作溶液和试样溶液,按8.2的色谱条件进行色谱分析测定。测定时,样品溶液与标准工作溶液等体积进样测定,并保证样品溶液中的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内,试样溶液中待测物超出线性范围时适当稀释后再用于色谱分析。糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷一氢查耳酮标准溶液的高效液相色谱图参见附录A。
9 结果计算与表述
试样中糖精钠、纽甜和新甲基橙皮苷二氢査耳酮的含量w,以质量分数“%”表示,按下式计算:
式中:
c-由标准曲线得出的试样中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮首二氢査耳酮的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mmL):
V一试样溶液总体积,单位为毫升(mL);
n-稀释倍数;
m-试样的质量,单位为克(g);
测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留至小数点后2位。
10 精密度
在重复性条件下,两次独测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的5%。
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