登录
葡萄酒中_番茄交链孢菌毒素_交链孢烯_交链孢毒素I_链格孢酚单甲醚_细交链孢菌酮酸_交链孢酚_腾毒素
1、范围
本文件规定了葡萄酒中7种链格孢霉毒素（番茄交链孢菌毒素、交链孢烯、交链孢毒素I、链格孢酚单甲醚、细交链孢菌酮酸、交链孢酚、腾毒素）的高效液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用葡萄酒中7种链格孢霉毒素的测定和确证。
2、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法
LS/T6133-2018粮油检验主要谷物中16种真菌毒素的测定液相色谱-串联质谱法
T/AFFI038-2023葡萄干中8种真菌毒素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
3、术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4、原理
试样经甲酸乙腈溶液超声提取，QuEChERS法净化后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，供高效液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法定量。
5、试剂和材料
本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 乙腈：色谱纯。
5.1.2 甲醇：色谱纯。
5.1.3 甲酸：优级纯。
5.1.4 氯化钠：优级纯。
5.1.5 无水硫酸镁粉末。
5.1.6 十八烷基（C18）粉末。
5.1.7 N-丙基乙二胺（PSA）粉末。
5.1.8 1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸用乙腈定容到100mL。
5.1.9 50%乙腈溶液：取50mL乙腈和50mL水混合均匀。5.2标准品全国团体标准信息平台
T/NAIA 0294—2024 2
5.2.1 标准品：番茄交链孢菌毒素（AAL，CAS号79367-52-5）、交链孢烯（ALT，CAS号29752-43-0）、交链孢毒素I（ATX-1，CAS号56258-32-3）、链格孢酚单甲醚（AME，CAS号26894-49-5）、细交链孢菌酮酸（TEA，CAS号610-88-8）、交链孢酚（AOH，CAS号641-38-3）、腾毒素（TEN，CAS号28540-82-1）。
5.2.2 标准储备液（100.0μg/mL）：分别准确移取7种链格孢霉毒素标准物质适量，分别用乙腈溶解并定容,配制成100.0μg/mL的标准储备溶液，于-20°C避光贮存。
5.2.3 混合标准储备溶液的配制：分别准确吸取7种链格孢霉毒素各1.0mL于10mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合标准储备液于-20°C避光贮存。
CAS号：28540-82-1，商品编号：XB06354，品牌：XBRM，型号：100μg/mL，规格：1ml
5.2.4 7种真菌毒素标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白葡萄酒基质定容至1.0mL，配制成7种链格孢霉毒素的浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的系列标准工作溶液，临用现配。
6、仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。
6.2 天平：感量0.1mg和0.01g。
6.3 涡旋混合器。
6.4 高速冷冻离心机：最大转速10000r/min。
6.5 超声波发生器。
6.6 氮吹仪。
7、分析步骤
7.1 试液的提取
称取10g（精确至0.01mg）混匀的葡萄酒样品于50mL具塞离心管中,准确加入10mL含1%甲酸的乙腈溶液和5g氯化钠，涡旋混匀，超声提取10min，8000r/min离心5min。吸取6mL上清液加入至盛有无水硫酸镁150mg，C18粉末50mg和N-丙基乙二胺（PSA）50mg的净化管中，经涡旋离心，对提取物进行净化处理。移取上清液2.0mL于45°C氮气保护下吹干，用50%的乙腈溶液复溶至2.0mL，经0.22μm有机滤膜过滤后上机测定。
7.2 仪器参考条件
7.2.1 液相色谱参考条件7.2.1.1色谱柱：C18，2.1mm×100mm，粒径1.7μm或性能相当。
7.2.1.2 柱温：25°C。
7.2.1.3 流动相：A-水（含0.1%甲酸），B-甲醇；梯度洗脱见表1。
7.2.1.4 流速：0.25mL/min。
7.2.1.5 进样量：5μL。
表1流动相及梯度洗脱条件
| 时间/min | 流速/（mL/min） | 流动相A/% | 流动相B/% |
| 0.00 | 0.25 | 90 | 10 |
| 1.00 | 0.25 | 85 | 15 |
| 2.00 | 0.25 | 80 | 20 |
| 8.00 | 0.25 | 40 | 60 |
| 13.00 | 0.25 | 17 | 83 |
| 15.00 | 0.25 | 5 | 95 |
| 15.10 | 0.25 | 90 | 10 |
| 18.00 | 0.25 | 90 | 10 |
7.2.2 质谱参考条件
7.2.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.2.2.2 扫描方式：正离子扫描和负离子扫描。
7.2.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）。
7.2.2.4 脱溶剂气温度：325°C。
7.2.2.5 脱溶剂气流速：800L/Hr。
7.2.2.6 锥孔流速：150L/Hr。
7.2.2.7 定性离子对、定量离子对、碰撞能量等参数参见附录A。
7.3 定量测定
根据试液中被测物含量情况，选定浓度相近的基质标准混合使用液，基质标准混合使用液和待测试液中被测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。基质标准混合使用液与试液等体积进样测定。标准溶液及试液均按7.2.1和7.2.2规定的条件进行测定，如果试液中与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行确证，7种链格孢霉毒素的参考保留时间见表2。7种链格孢霉毒素标准品的多反应监测（MRM）色谱图参见附录B，采用基质溶液校准曲线外标法定量。
表2 参考保留时间
| 被测物名称 | 保留时间/（min） |
| 番茄交链孢菌毒素（AAL） | 3.89 |
| 交链孢烯（ALT） | 4.17 |
| 交链孢毒素I（ATX-1） | 4.37 |
| 链格孢酚单甲醚（AME） | 5.87 |
| 细交链孢菌酮酸（TEA） | 8.13 |
| 交链孢酚（AOH） | 8.99 |
| 腾毒素（TEN） | 9.54 |
7.4定性测定
经确证分析被测物质色谱峰保留时间与标准物质相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现。同时所选择离子的丰度比与标准溶液中相关离子的相对丰度一致，相似度在允许偏差之内（见表3），则可判定样品中存在对应的被测物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
| 相对离子丰度 | ＞50% | ＞20%至50% | ＞10%至20% | ≤10% |
| 允许的相对偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
7.5空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。
素材来源于网络，如有侵权请联系删除
2238774038