甘蔗中3-硝基丙酸含量的测定液相色谱-质谱/质谱法

 

 

 

1、范围

 

    本文件规定了甘蔗中的3-硝基丙酸的液相色谱—质谱/质谱测定方法。

 

    本文件适用于甘蔗中3-硝基丙酸含量的测定。

 

2、规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

    GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测

 

3、术语和定义本

 

文件没有需要界定的术语和定义。

 

4、原理

 

 

 

 

利用乙腈振荡提取甘蔗样品中3-硝基丙酸（3-NPA），提取液离心过滤，上清液经乙二胺-N-丙基（PSA）固相萃取柱净化浓缩后，用液相色谱-质谱/质谱法测定目标物，结果通过外标法进行定量。5试剂和材料除非另有说明，本文件所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

 

5、试剂和材料

 

5.1.1  乙腈（C2H3N）：色谱纯。

 

5.1.2  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

 

5.1.3  甲酸（CH2O2）：色谱纯。

 

5.1.4  氨水（NH4OH）。试剂配制5.2.11%氨水-甲醇溶液：吸取1.0mL氨水，用甲醇稀释至100mL，混匀。

 

5.2.2  0.5%甲酸水溶液：吸取5.0mL甲酸，用水稀释至1000mL，混匀。标准品3-硝基丙酸（3-NPA，C8H5NO6，CAS：603-11-2）：纯度≥97.0%。标准溶液配制

 

5.4.1  标准储备液（100μg/mL）：称取3-硝基丙酸标准品0.01g（精确到0.0001g），用乙腈溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，配制成质量浓度为100μg/mL的标准储备液，于-20°C条件下保存，有效期三个月。

 

5.4.2  标准使用液（1.00μg/mL）：准确量取标准储备液1.0mL至100mL容量瓶，用乙腈定容，配制成1.00μg/mL的标准使用液，临用时配制。

 

5.5  材料

 

5.5.1  乙二胺-N-丙基（PSA）固相萃取柱：3cc，500mg，或其他等效柱。

 

5.5.2  定性分析滤纸。

 

5.5.3  微孔滤膜：0.2μm，水相。

 

 

6、仪器和设备

 

a)电子天平：感量为0.001g，0.0001g。

 

b)涡旋混匀器。

 

c)震荡器。

 

d)离心机：转速≥8000r/min。

 

e)研磨机。

 

f)氮吹仪。

 

g)液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源ESI。

 

 

7、析步骤

 

7.1  试样制备

 

    甘蔗切块，研磨机研磨打碎，4°C保存，尽快处理。如发现甘蔗有颜色异常、质地发软等霉变现象，可针对霉变部分单独取样。

 

7.2  试样的提取和净化

 

    称取2g（精确到0.001g）制备好的样品于50mL离心管中，管中加入20mL乙腈后利用涡旋混匀器混匀。将离心管放置于与震荡器上振荡30min后，于8000r/min离心10min，上清液经定性滤纸过滤得到滤液。

 

    PSA固相萃取柱用3mL乙腈活化后，取10mL滤液过柱,用4mL1%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液于40°C水温中氮吹至近干，用0.5%甲酸水溶液定容至1.0mL得到待测样品（下文简称样品），样品经0.2μm水相微孔滤膜过滤后待测上机。

 

7.3  基质加标标准工作曲线溶液的制备

 

    称取7份不含3-NPA的空白甘蔗样本2g（精确到0.001g）作为基质，分别加入1.00μg/mL标准使用液20、40、100、200、400、800、1000μL，并按照7.2节方法进行提取和净化后，制备浓度依次为10.0、20.0、50.0、100、200、400、500ng/mL的系列标准工作曲线溶液。

 

注：根据仪器性能和检测需要，应制备不少于5个浓度水平的标准工作曲线溶液。仪器参考条件

 

7.4.  1色谱参考条件

 

7.4.1.1  色谱柱：十八烷基硅烷反相色谱柱（100mm×2.1mm,1.8μm），或者相当者。

 

7.4.1.2  流动相：A相，水；B相，乙腈。

 

7.4.1.3  流速：0.3mL/min。

 

7.4.1.4  梯度洗脱：洗脱程序见表1。

 

表1梯度洗脱程序

 

 

时间/min	流动相A/%	甲醇/%
0.0	95	5
2.0	50	50
2.1	10	90
3.0	10	90
3.1	95	5
7.0	95	5

 

7.4.1.5  柱温：40°C。

 

7.4.1.6  进样量：5.0μL。

 

7.4.2  质谱参考条件

 

7.4.2.1  离子源：电喷雾离子源ESI，离子源温度550°C。

 

7.4.2.2  扫描模式：负离子扫描模式。

 

7.4.2.3  检测方式：多离子反应监测（MRM）。

 

7.4.2.4  喷雾电压：-4500V。

 

7.4.2.5源内气：55psi。

 

7.4.2.6  辅助气：55psi。

 

 

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