水果制品中5种糠醛类化合物的测定液相色谱法

 

 

 

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1  范围

 

    本文件规定了水果制品中5种糠醛类化合物检测的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、结果计算和定量限、回收率和精密度等。

 

    本文件适用于水果制品包括果酱（泥）、水果干类、水果罐头中5-羟甲基糠醛、糠醛、呋喃酮、2-乙酰呋喃和5-甲基糠醛的测定。

 

 

 

2  规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

 

 

3  术语和定义

 

    本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

4  原理

 

    试样中的糠醛类化合物，经甲醇提取，反相色谱柱分离，液相色谱仪紫外检测器测定。以保留时间作为定性检测，外标法定量。

 

 

5  试剂和材料

 

    除特殊注明外，所有试剂均为分析纯试剂，水应为符合GB/T6682规定的一级水。

 

5.1  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

 

5.2  甲酸（CH2O2）：色谱纯。

 

5.3  甲酸水溶液（0.1%）：量取1mL甲酸，加入到1000mL的容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.4  标准品：5-羟甲基糠醛（5-Hydroxymethylfurfural,C6H6O3,CAS:67-47-0），糠醛（Furfural,C5H4O2,CAS:98-01-1），呋喃酮（Furaneol,C6H8O3,CAS:3658-77-3），2-乙酰呋喃（2-Acetylfuran,C6H6O2,CAS:1192-62-7），5-甲基糠醛（5-Methylfurfural,C6H6O2,CAS:620-02-0），纯度均≥98%。

 

5.5  标准储备液：分别准确称取5-羟甲基糠醛、糠醛、呋喃酮、2-乙酰呋喃和5-甲基糠醛标准品10mg（精确至0.1mg）于烧杯中，用少量甲醇溶解，将溶液沿玻璃棒转移到10mL容量瓶中，甲醇多次清洗烧杯，同样方法转移至容量瓶中，定容，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液，置于4°C下保存。

 

5.6  混合标准工作液：分别量取不同体积的糠醛类化合物标准储备液（4.5）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为0.2、1、5、10、20和50mg/L的混合标准工作液。现配现用。

 

5.7  滤膜：0.45μm有机滤膜。

 

 

6  仪器和设备

 

6.1  液相色谱仪：配有紫外检测器。

 

6.2  分析天平：感量0.0001g和感量0.01g。

 

6.3  超声波清洗器：400W，40kHz。

 

6.4均质器。

 

6.5  涡旋振荡器。

 

6.6  离心机，10000r/min。

 

6.7  氮吹仪。

 

 

7  试样制备与保存

 

7.1  试样制备取代表性样品约500g，经均质器均质混匀，均分为两份，装入洁净容器内，作为试样密封并标明标记。试样保存

 

7.2.1  试样应于-18°C以下保存。

 

7.2.2  制样中，应防止样品受到污染或糠醛类化合物含量发生变化。

 

 

8  测定步骤

 

8.1  提取及净化

 

    称取试样5.0g（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加入15mL甲醇，涡旋混匀，超声提取20min，10000r/min离心10min，上清液收集于50mL带刻度试管中，残渣再用15mL甲醇提取一次，合并提取液。提取液氮吹至近干，再用甲醇溶解并定容至2mL，0.45μm滤膜过滤，供液相色谱仪测定。

 

8.2  测定

 

8.2.1  液相色谱参考条件

 

    a)色谱柱：C18柱（4.6×250mm，粒径5μm），或相当者；

 

    b)流动相：0.1%甲酸水+甲醇，梯度洗脱程序见表1；

 

    c)流速：1.0mL/min；

 

    d)柱温：35°C；

 

    e)进样体积：10μL；

 

    f)检测波长：285nm。

 

 

表1梯度洗脱程序

 

时间/min	0.1%甲酸水/%	甲醇/%	备注
0	85	15	分析
2	85	15	分析
14.5	65	35	分析
14.6	10	90	洗柱
17.00	10	90	洗柱
17.01	85	15	平衡
25.00	85	15	平衡

 

 

8.2.2  标准曲线绘制

 

    取不同浓度的混合标准工作液，供液相色谱仪测定，以测得的峰面积为纵坐标，对应的混合标准工作液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。5种糠醛类化合物标准溶液色谱图参见附录A的图A.1。

 

8.2.3  液相色谱测定

 

    按照保留时间进行定性，样品与标准品保留时间的相对偏差不大于2%。待测样液中糠醛类化合物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析，外标法定量。

 

8.2.4  空白试验

 

    不加试样的空白试验应采用与试样测定完全相同的试剂、设备和步骤进行。

 

 

 

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