食品中禁用水溶性合成色素的测定 液相色谱-串联质谱法

 

 

 

1、范围

 

    本文件规定了食品中32种禁用水溶性合成色素（见附录A）的液相色谱-串联质谱测定方法。

 

    本文件适用于饮料、葡萄酒、糖果、调味酱、豆制品、熟肉等食品中32种禁用水溶性合成色素的测定。

 

 

 

2、规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

    GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法

 

 

3、术语和定义

 

    本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

4、原理

 

    试样经甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液经氮吹置换溶剂后，经C18萃取小管净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

 

 

5、试剂和材料

 

    除另有说明，本实验使用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水或GB/T33087中规定的高纯水。

 

5.1  试剂

 

5.1.1  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

 

5.1.2  乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

 

5.1.3  氨水（NH3·H2O）：含量20%～25%

 

5.1.4  5%氨水甲醇溶液：移取5mL氨水于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

 

5.1.5  10%甲醇水溶液：移取10mL甲醇于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.2  标准品

 

    32种禁用水溶性合成色素标准品：参见附录B，纯度≥95%。

 

5.3  标准溶液配制

 

5.3.1  标准储备溶液（1000mg/L）：分别准确称取经折算相当于50mg（精确到0.1mg）的色素标准品，置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6个月。

 

5.3.2  混合标准储备液A组（10mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取1mL的A组色素单标储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下保存，保存期3个月。

 

5.3.3  混合标准储备液B组（100mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取1mL的B组色素单标储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6个月。

 

5.3.4  混合标准中间液A组（1mg/L）：准确移取1mL混合标准储备液A组于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。临用现配。

 

5.3.5  混合标准中间液B组（10mg/L）：准确移取1mL混合标准储备液B组于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。临用现配。

 

5.3.6  混合标准工作溶液：根据需要，用10%甲醇水溶液将混合标准中间液稀释成所需的标准工作溶液。

 

5.4  材料

 

5.4.1  十八烷基硅烷键合硅胶（C18材料）：粒径40μm～60μm。

 

5.4.2  亲水聚四氟乙烯微孔滤膜：0.22μm。

 

6、仪器和设备

 

6.1  液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾电离源（ESI）。

 

6.2  分析天平：感量为0.1mg、0.01g。

 

6.3  离心机：转速不低于8000r/min。

 

6.4  超声波清洗器。

 

6.5  氮吹仪。

 

7  分析步骤

 

7.1  试样制备饮料、葡萄酒、调味酱试样应混合均匀，含气饮料及葡萄酒试样应先加热或超声去除二氧化碳后混合均匀，糖果、豆制品、熟肉试样经食品粉碎机搅碎混匀，制备好的试样密封冷藏避光保存，备用。

 

7.2  试样提取

 

7.2.1  饮料、葡萄酒试样

 

 

 

    称取试样1g（准确至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。准确移取2mL至含有50mgC18材料的净化管中，涡旋1min，在8000r/min下离心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，过0.22μmPTFE滤膜，待测。

 

7.2.2  糖果试样

 

 

 

    糖果：称取试样2g（准确至0.01g）于小烧杯中，加入5mL甲醇，微热溶解后，溶液转移至10mL比色管，用甲醇多次洗涤烧杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。准确移取2mL至含有50mgC18材料的净化管中，涡旋1min，在8000r/min下离心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，过0.22μmPTFE滤膜，待测。

 

    其他：

 

7.2.3  调味酱、豆制品、熟肉试样

 

    称取试样2g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入10mL5%氨水甲醇溶液，超声5min，在8000r/min下离心5min，重复提取一遍，合并上清液。准确移取2mL上清液于氮吹仪上氮吹至干，用2mL甲醇复溶，转移至含有50mgC18材料的净化管中，涡旋1min，在8000r/min下离心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，过0.22μmPTFE滤膜，待测。每个样品做2个平行测试，同时做空白测试。

 

7.3  仪器参考条件

 

7.3.1  液相色谱参考条件

 

    a)  色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色谱柱；

 

    b)  流动相：A为5mmol/L乙酸铵水溶液，B为甲醇；梯度洗脱条件见表1；

 

    c)  柱温：40°C；

 

    d)  进样量：2μL；

 

    e)  流速：0.4mL/min。

 

表1液相色谱梯度洗脱条件

 

时间，min	流动相A，%	流动相B，%
0.00	98	2
1.00	98	2
15.00	5	95
18.00	5	95
21.00	98	2

 

 

7.3.2  质谱参考条件

 

    a)  离子源类型：电喷雾电离源（ESI）；

 

    b)  扫描方式：负离子电离模式；

 

    c)  检测方式：多反应监测MRM；

 

    d)  毛细管电压：-2.5kV；

 

    e)  离子源温度：150°C；

 

    f)  脱溶剂气温度：500°C；

 

    g)  脱溶剂气流速：1000L/h；

 

    h)  锥孔气流速：150L/h；

 

    i)  定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞电压参见附录A。

 

7.4  试样溶液的测定

 

7.4.1  定性分析

 

    在同样测试条件下，试样溶液中禁用水溶性合成色素的保留时间与标准溶液相应峰的保留时间相对偏差在±25%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的标准溶液相对离子丰度一致。其允许偏差应符合表2的要求。

 

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

单位为百分号

相对离子丰度	允许偏差
＞50	±20
20～50	±25
10～20	±30
≤10	±50

 

 

7.4.2  定量测定

 

    取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以特征离子质量色谱峰面积定量，按外标法计算。标准工作液及试样溶液中的禁用水溶性合成色素响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准溶液特征离子质量色谱图见附录B。

 

7.5  空白试验

 

    除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行测定。

 

 

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