粮油检验 谷物中黄曲霉毒素 B1的测定时间分辨荧光免疫层析定量法

 

 

 

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1 范围

 

本文件规定了时间分辨荧光免疫层析定量法测定谷物中黄曲霉毒素B1的原理、试剂及材料、仪器及设备、样品制备、样品测定、结果表述和精密度。

 

本文件适用于谷物中黄曲微毒案B1的快速检测。

 

本文件的方法检出限为 0.7 g/Lg,定量限为 2.0 g/kg。

 

 

 

 

2 规苑性引用文件

 

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注口期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

 

GB 2761 食品安企国家尿湘 食品中真南毒素限量

 

GB 5009.22 2016 食品安企国家标湘 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

 

GB/T 5491 粮食,油料检验 扦样,分样让

 

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

 

 

3 原理

 

试样中黄曲霉毒素B1与含铕-螯合物的聚苯乙烯微球标记的特异性抗休发生结合后，抑制了层析过程中抗体与硝酸纤维膜检测线上黄曲霉毒素B1-BSA 偶联物的免疫反应,使检测线上荧光强度降低，通过荧光强度变化和荧光分析仪的内置曲线自动计算出试样中黄曲霉毒素B1的含量。

 

 

 

 

4 试剂与材料

 

除另有说明外，所用试剂均为分析纯,实验室用水应符合 GB/T 6682 中三级水的要求。

 

4.1 甲醇

 

4.2 甲醇溶液:取70 mL甲醇加人30mL.水，混约。

 

4.3 样品稀释液:由产品配套提供，或根据产品说明书配制。

 

4.4 黄曲露毒素B1时间分辨荧光免疫层析卡(以下简称“免疫层析卡")：经测定免疫层析卡的性能应符合附录 A 的规定,具体储存条件参照使用说明。

 

 

5 仪器与设备

 

5.1 天平:感量 0.01 g。

 

5.2 粉碎机:电机转≥1 000 r/mim,可使试样粉碎后全部通过 0.85 mim 箭孔。

 

5.3 离心机：转速≥3 000 r/mmin。

 

5.4 振荡器:转速≥2 500 r/mmin。

 

5.5 离心管:50 mL和 1.5 mL。

 

5.6 黄曲霉毒素B1时间分辨荧光分析仪(以下简称“荧光分析仪”):激发波长为365nm±5 nm,发射波长为 615 nmn±5 nm。

 

 

6 样品制备

 

6.1  扦样与分样

 

按照 GB/T 5491 执行,在采样过程中,应防止样品污染,取代表性样品不少于 500 g。

 

6.2  样品粉碎

 

用粉碎机(5.2)将样品粉碎至全部通过 0.85 m 筛孔，充分混合均匀。

 

 

6.3  样品处理

 

准确称取 5g(精确到0.01g)样品(6.1)于50 mL离心管(5.5)中,加人 25 mL甲醇溶液(4.2),用振荡器(5.4)震荡提取5min,的置 1 min,取50μL提取加人 650μL样品稀释液（4.3)混合,以 3 000r/min离心3 min,取上清液待测。

 

注:不同厂家检测所用的样品测定可能会略有不同,按照产品使用说明中规定方法进行操作。

 

 

7 样品测定

 

7.1  免疫层析卡(4.4)取出 10 min,恢集至室温后待用。

 

7.2  荧光分析仪(5.6)该取标准曲线后进人测试界面,准确移取 100μL 待测溶液(6.3),加人免疫层析卡加样孔中,孵育 10 min 后,立即将免疫层析卡放人荧光分析仪中进行检测(1 min 后读取的检测结果判读无效)。

 

注:不同厂家检测所用的样品测定可能会略有不同,按照产品使用说明中规定方法进行操作。

 

 

8 结果表述

 

试样申黄曲霉毒素B1含量由荧光分析仪自动计算并显示,单位为微克每千克(μg/kg)。计算结果以重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的算数平均值表示,保 3 位有效数字。当结果超过GB 2761 限量些求或临界时,应按 GB 5009,22-2016 中第一法,第二法或第三法确认。

 

 

9 精密度

 

9.1 重复性

 

在重复性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值大于重复性限值(r)的情况应不超过 5%,黄曲等毒素B1含量的重复性限值(r)见附录B。

 

9.2 再现性

 

在再现性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值大于再现性限值(R)的情况应不据过5%。黄曲霉毒素B1，含量的再现性限值(R)见附录B。

 

附录A
(规范性）

时间分辨荧光免疫层析法产品的性能评价要求

 

本附录规定了时间分辨荧光免疫层析卡的技术性能要求,用于对每批次时间分辨荧光免疫层析法产品的技术性能进行验证,以确认其适用于本方法。

 

A.1 检出限和定量限

 

通过对 20 个独立的空白样品进行测定,检出限以空白样品 20 次测定结果的均值加 3 倍标准偏差计算;定量限以空白样品 20 次测定结果的均值加 10 倍标准偏差计算,其结果应小于或等于产品标示值并满足本标准。

 

A.2 准确性和重复性

 

采用高(25.0μg/kg),中(10,0μg/kg)、低(2.0μg/kg)3 个含量水平的自然污染有证标准物质或采用国家标准方法定值的自然污染样品,每个含量水平测试不低于 6 次。针对每个含量水平的准确率应在80%~120%容许范围内，重复性相对标准偏差应小于15%。

 

 

 

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